Caracterización de la Proteína Usando el Medidor de Cuchilla de Multisizer 4

Por AZoM

Índice

Introducción

Multisizer 4 de la Cuchilla de Beckman ofrece un sistema convivial, tecnológico-sofisticado que pueda resolver la mayoría de los retos del apresto el contar y de la partícula. El Multisizer 4 ha utilizado el Principio de la Cuchilla con Tecnología Elegante, asegurando uniformidad, el estado coherente del análisis de la muestra y la repetibilidad de resultados. Los procedimientos de limpieza tienen valores al caracterizar partículas muy pequeñas en las concentraciones inferiores. Este artículo discute en detalles los procedimientos del análisis.

Requisitos Materiales

Los materiales requeridos para el análisis en el Multisizer 4 son:

• Nalgene Frasco de la Muestra de 5 ml (Fisher P/N 6250-0005).
• Adaptador del Escenario (Cuchilla P/N A93166 de Beckman).
• Producto De Limpieza De Discos del Detersorio Neutral (Cuchilla P/N 8304096 de Beckman).
• Aperturas Recomendadas: 30 mm, 50 mm, 70 mm, o 100 mm.
• Escobilla Interna de la Apertura (Cuchilla P/N 54060001 de Beckman).
• Escobilla Externa de la Apertura (Cuchilla P/N 5406011 de Beckman).
• ST de Accuvette (Cuchilla P/N A35473 de Beckman).
• 200-mL Aumentó el Cubilete del Funcionamiento (Cuchilla P/N A35596 de Beckman).
• Alcohol Isopropilo (opcional).
• Recipiente Adicional del Electrólito para la Solución Jabonosa Del 2% (Cuchilla P/N A36403 de Beckman) (opcional).
• Filtros de la Jeringa.
  • Paño Mortuorio Acrodisc Filtros del PES de 25 milímetros.
  • 0,45 poros del mm (Cuchilla P/N 4614 de Beckman).
  • 0,20 poros del mm (Cuchilla P/N 4612 de Beckman).

Procedimientos

Lanzamiento del Instrumento

En el caso del estudio analizado en este artículo, el Multisizer 4 ha estado ocioso para más de 72 h; el vaciar relanzado con una solución del 2% del detersorio neutral se recomienda. Opcionalmente, el alcohol isopropilo (IPA) puede ser utilizado. Se quitan Cualquier cristal de la sal, la suciedad u otros contaminantes, que se pudieron haber formado en el sistema mientras que estaban ociosos.

Procedimiento De Lanzamiento

El procedimiento de lanzamiento del Multisizer 4 comprende los pasos de progresión siguientes:

1. Elija la “Corrida”, después “Drene el Sistema” en la barra de menú del software de Multisizer 4. Siga las instrucciones en pantalla.
2. Al drenar del sistema, llene la botella del electrólito de la solución de la limpieza (jabón del 2% o IPA).
3. Reemplace la botella del electrólito en el Multisizer 4.
4. Seleccione la “Corrida”, después “Llene el Sistema” en la barra de Menú.
5. Después de llenar del sistema, relance los pasos de progresión 1-4. Relance el ciclo entero tres veces.
6. Después De Que el desagüe final, llene el sistema de Isoton alto-filtrado II que deba venir de un sistema contínuo de la filtración.

Es importante observar que el tanque inútil interno puede convertirse por completo durante este proceso. En ese caso, el “Tanque Inútil Vacío” debe ser seleccionado cuando está incitado. Esto bombeará el contenido del tanque inútil interno al recipiente del desecho del externo.

Muestras Corrientes

1. Instale el adaptador del escenario. El Escenario de la Muestra como aparecerá en el inicio de experimentos se muestra en el Cuadro 1.

   

   Cuadro 1. El adaptador de la mini-cubeta permite que los utilizadores operatorio el Multisizer 4 con tan poco como 4 ml de material.

2. Llene una copa de 5 ml Nalgene del almacenador intermediaro del interés. Es importante observar que para los resultados exactos, este almacenador intermediaro debe corresponder con el almacenador intermediaro en el recipiente del electrólito.
3. Pruebe el nivel de ruidos en el almacenador intermediaro del interés. De la barra de menú, elija “”/“” de la Corrida/“de la Localización De Averías Inspección el nivel de ruidos”. Un rectángulo móvil aparecerá. Elija el “Nivel De Ruidos de la Dimensión” tal y como se muestra en de las Figuras 2A y 2B.

   

   Figure 2A. Tiro de Pantalla mando “Inspección del nivel de ruidos” bajo Menú de la Corrida/Localización De Averías.

   

   Figura 2B. Tiro de Pantalla “del mando del Nivel De Ruidos de la Inspección”. Después de seleccionar el “Nivel De Ruidos de la Dimensión”, los resultados deben corresponder con o exceder las recomendaciones en el Cuadro 1.

4. Controle si las configuraciones estándar del modo (SOM) operatorio están configuradas según lo indicado. Elija “Corrigen el SOM” para sacar a colación el menú del SOM. Vea las Figuras 3A y 3B.

   

   Figure 3A. Tiro de Pantalla del Menú del “SOM”. Selecto “Corrija el SOM” para abrir el menú del SOM.

   

   Figure 3B. El tiro de Pantalla “Corrige del Menú del SOM”. Utilice las tabulaciones en el menú del SOM para navegar. Asegure a todo el emparejamiento de las configuraciones ésos descritos en el texto.

   1. Bajo “tabulación del Modo de Mando” - Verifique si el modo de mando esté fijado a volumétrico. El máximo recomendó el volumen analítico es 100 ml por corrida. Selecto “Apliqúese”.
   2. Bajo “tabulación de las Configuraciones de la Corrida” - Asegúrese que “Incluya los Datos del Pulso” esté controlado. El Número de Corridas debe ser “tubo Enrasado Selecto de la Apertura 3. después de que tubo funcionado con” y “Enrasado cada uno de la Apertura antes del estreno”. Selecto “Apliqúese”.
   3. Bajo tabulación del “Agitador” - Controle si el “ST de Accuvette” está seleccionado bajo el “Cubilete de la Muestra”. El Tecleo “Se Aplica”.
   4. Bajo tabulación de la “Corriente y del Avance” - Verifique que el umbral del apresto esté en o por debajo de la talla recomendada más inferior del Cuadro 1.
   5. Bajo “Pulso Para Clasificar tabulación de las Configuraciones” - Verifique que la configuración está en o por encima de la talla recomendada más inferior enumerada en “COMPENSACIÓN Selecta” del Cuadro 1. en la barra de menú, después “Corrija el SOM.” Elija el “Pulso Para Clasificar las Configuraciones” cuadro. Controle el valor en el rectángulo al lado de la palabra “de”. Selecto “Apliqúese”.
   6. Bajo tabulación de la “Concentración” - Incorpore la información de la dilución si procede.
   7. Bajo tabulación del “Bloqueo” - Seleccione la “Detección del Bloqueo”. Seleccione los “Valores Por Defecto” entonces “ACEPTABLES”. Seleccione el “Monitor del Bloqueo…”, los “Valores Por Defecto” y después seleccione “ACEPTABLE”.
5. Una Vez Que se hace el protocolo del SOM, realice una muestra del almacenador intermediaro solamente seleccionando “Comienzo”. Una muestra del almacenador intermediaro solamente debe leer menos de 100 partículas totales en una muestra del ml 100. Para validar esto, asegúrese de que el “Número” bajo gráfico el menú de persiana en la ventana de los datos se ha seleccionado. Entonces, controle la cuenta de partícula en el rectángulo de las estadísticas. Véase el Cuadro 4 para la referencia.

   

   Cuadro 4. tiro de Pantalla de la corrida de la muestra del almacenador intermediaro solamente. El número total de partículas debe ser menos de 100 para una corrida de un espacio en blanco del ml 100. El “Número” debe ser menos de 100 para el análisis de 100 ml de un espacio en blanco

6. Una Vez Que una corrida del almacenador intermediaro solamente es completa, el instrumento está listo para funcionar con muestras. Quite el espacio en blanco, cargue la muestra, y seleccione el “Comienzo”.
7. En caso de que ocurra un bloque, siga el paso de progresión 8" Después De Que la corrida sea completa”.
8. Después De Que la corrida sea completa, baje el escenario. Llene un cubilete o un Accuvette de una solución jabonosa del 2% y sumerja la apertura puede sujetar el cubilete disponible y dejar la puerta abierta. Selecto “Desbloquee” en el software de Multisizer 4. Esto vaciará en varias ocasiones la solución jabonosa a través de la apertura y quitará cualquier proteína. Esto es necesario pues las proteínas tienden a adherirse a todas las superficies. Después De Que el procedimiento del despejado sea completo, cargue la muestra en blanco, cierre la puerta, y seleccione el “Avance”. El contador de la concentración debe ser constante en 0,0%. Puede tardar algunos segundos antes de que se estabilice. Éste es el tiempo necesario vaciar de distancia cualquier muestra restante tal y como se muestra en de las Figuras 5A y 5B.

   

   Figura 5A. Con la puerta abierta, sujete un cubilete llenado de la solución jabonosa del 2% alrededor de la apertura.

   

   Figure 5B. Mientras Que sujeta el cubilete con la solución jabonosa, selecta “Desbloquee” el botón en el software.

9. Relance los pasos de progresión 6-8 hasta que se terminen todas las muestras.

Equipe Cerrado Durante La Noche

1. Llene un cubilete de 200 ml de la solución jabonosa del 2%. Mueva De Un Tirón el escenario encima para poder acomodar el cubilete. Coloque el cubilete en el escenario, pero no lo aumente.
2. En el software de Multisizer 4, “COMPENSACIÓN selecta” en la barra de menú. Selecto “Corrija el SOM”. Bajo el “Cubilete de la Muestra”, seleccione de “el ST 200 ml”. Asegúrese de que “el rectángulo del Agitador del Uso” esté seleccionado y la velocidad del agitador es 20. Selecto “Apliqúese”. El agitador debe trasladarse a la posición respecto al Multisizer 4.
3. El escenario se aumenta con el cubilete de 200 ml. El agitador debe comenzar a moverse sumergido una vez. El sistema se puede dejar de noche con este ajuste. El next day, el “Ejecutarse Muestrea” la sección de esta necesidad del procedimiento de ser seguido.

Sobre la Cuchilla de Beckman

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Esta información ha sido originaria, revisada y adaptada de los materiales proporcionados por la Cuchilla de Beckman.

Para más información sobre esta fuente, visite por favor la Cuchilla de Beckman.